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深圳市樸瑞生物科技有限公司

糖化血紅蛋白測定中的常用檢測方法

來源: 深圳市樸瑞生物科技有限公司 人氣:4330 發(fā)表時(shí)間:2020/04/20 14:43:23

離子交換色譜法(HPLC、LPLC):基于電荷差異進(jìn)行分析。葡萄糖與血紅蛋白(Hb)的β鏈N末端纈氨酸(Val)結(jié)合降低了等電點(diǎn),導(dǎo)致糖化Hb帶的正電荷比未糖化Hb的少,與樹脂的附著力小,可以分別用不同的離子濃度的緩沖液在不同的時(shí)間將Hb從陽離子交換柱中洗脫下來,再根據(jù)每個(gè)峰值下的面積來計(jì)算HbA1c占總Hb的比例。


精密度高,有些產(chǎn)品CV可以小于1%


非特異性問題存在,有些產(chǎn)品仍會(huì)受變異Hb 、氨基甲酰化和乙?;疕b影響


可采用高通量的高效液相色譜(HPLC)和低壓系統(tǒng)(LPLC)方法


美國糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)化計(jì)劃(NGSP)的參考方法


電泳法(Elec):研制于上世紀(jì)80年代,與離子交換層析法一樣也是基于糖化和非糖化Hb所帶的電荷不同進(jìn)行分離。該方法操作簡易,不受溫度、pH影響,在當(dāng)時(shí)相對其他方法來說精密度較高,但是需成批樣本分析,分析時(shí)間較長,臨床上現(xiàn)已較少使用。


親和色譜法(HPLC-af chr):基于結(jié)構(gòu)不同進(jìn)行分析。利用對m-氨苯基硼酸依賴的糖化血紅蛋白1,2-順式二醇基團(tuán)和固定的硼酸陰離子的特殊反應(yīng)而設(shè)計(jì)的。與Hbα和β鏈的纈氨酸(Val)和賴氨酸(?-Lys)連接的葡萄糖均會(huì)與硼酸結(jié)合形成可逆的復(fù)合物,未糖化Hb先被洗脫后,再用山梨醇分離復(fù)合物,并將全部糖化Hb洗脫出來。


檢測結(jié)果是“總”糖化Hb,通過校準(zhǔn)其結(jié)果與HPLC有良好的相關(guān)性


不受溫度、尿毒癥、HbF或Schiff base的干擾


室內(nèi)精密度較高,實(shí)驗(yàn)室間的結(jié)果存在差異


免疫法(Im tur):抗原抗體反應(yīng)原理。單克隆抗體技術(shù)的運(yùn)用使該方法有了快速發(fā)展,最早是英國Dako公司研制出識別葡萄糖附著在Hb的β鏈N末端8個(gè)氨基酸抗原位點(diǎn)的單克隆抗體,用酶免疫原理(EIA)進(jìn)行檢測。


具有較好的精密度、與其他方法有較好的相關(guān)性


可以在自動(dòng)生化儀上用比濁法進(jìn)行定量測定


抗原與IFCC一級參考物質(zhì)β鏈N末端6個(gè)氨基酸肽端相似


如果用6個(gè)氨基酸的為抗原,當(dāng)Hb發(fā)生第6位氨基酸變異[HbS(β6glu→val)和HbC(β6glu→lys)]時(shí)將不會(huì)被識別,可導(dǎo)致廠家間的檢測結(jié)果存在著偏倚


各廠家產(chǎn)品的單抗針對的抗原決定簇不同、親和力不同等因素也會(huì)影響結(jié)果的可比性


酶法(En):近幾年才推出在自動(dòng)生化儀上測定的生化反應(yīng)方法。其原理是在蛋白酶的作用下,切斷HbA1c的?鏈N末端的糖化二肽,糖化二肽在果糖基肽氧化酶的作用下生成過氧化氫,在過氧化物酶的存在下與顯色劑產(chǎn)生顯色反應(yīng),通過測定吸光度求出HbA1c的百分濃度。該方法精密度好,同HPLC和免疫法均有較好的相關(guān)性。


快速檢驗(yàn)(POCT:Mic chr、Flu im)